Microtécnica Vegetal

Identificação Macroscópica e Microscópica\n\n• Análise de drogas vegetais → órgão vegetal empregado\n\n• Identificação de grande número de drogas vegetais através da morfologia externa e anatomia:\n - Análise rápida, de custo reduzido\n - Verificação de identidade, fraudes e contaminações\n\n• Manutenção de coleções de drogas padrão e literatura especializada (Farmacopeias, livros e monografias complementares da OMS).\n\n• Droga vegetal não incluída em Farmacopeia atualizada → elaboração de monografia estabelecendo padrões de qualidade. Identificação Macroscópica e Microscópica\n\n• Estado de divisão da droga → procedimento a ser seguido:\n - Pós: características organolépticas e estruturas\n - Fragmentos maiores: macroscopia e cortes histológicos\n\n• Características microscópicas: forma de célula vegetal, conteúdo, espessamento da parede, tipos de tecidos e suas características e estruturas.\n\n• Parâmetros quantitativos → teor de conjunto de substâncias\n\n• Técnicas analíticas comparativas com as substâncias analisadas Microtécnica Vegetal\n\nConceito: Conjunto de conhecimentos e práticas destinadas a preparar materiais de origem vegetal para o estudo microscópico.\n• Material fresco – análise tecidual em preparações provisórias\n• Material fixado – estudo das estruturas anatômicas a longo prazo\n\nOperações Fundamentais da Microtécnica Vegetal\n\n1- Coleta e preparo de material\n\n• Após coleta, o material deve ser preparado imediatamente\n• Divisão em pedaços menores (0,5 cm), para facilitar a fixação Microtécnica Vegetal\n\n2- Fixação\n\nA fixação paralisa os processos vitais e os de autólise e estabiliza os processos celulares. Assim, visa a conservação a longo prazo. Exs.:\n• Etanol\n• FAA (Formaldeído, Ácido acético e Álcool etílico)\n• CRAF (Ácido crômico, Ácido acético e Formaldeído)\n• FAD (Formaldeído, Ácido acético, H2O dest. e dioxano)\n\nF 1:1:18 (v/v)\nFormaldeído 37%............50,0 mL\nAc. Acético glacial...........50,0 mL\nEtanol 50%...................900,0 mL\n\nFAA70 1:1:18 (v/v)\nFormaldeído 37%............50,0 mL\nAc. Acético glacial...........50,0 mL\nEtanol 70%...................900,0 mL Microtécnica Vegetal\n\n3- Desidratação\n\nA desidratação é a retirada de água dos tecidos, empregando-se, em geral, soluções alcoólicas crescentes, como série de hidratação.\n\n• Série Butanólica\n• Série Dioxânica\n• Série Etanólica\n\nExemplo de série etanólica\nÁlcool 5 % Álcool 70%\nÁlcool 15% Álcool 80%\nÁlcool 30% Álcool 90%\nÁlcool 50% Álcool 100% Microtécnica Vegetal\n4- Clarificação e Diafanização\nAlvejantes degradam diversos compostos como pigmentos, conteúdos celulares, etc. Promovem o clareamento dos cortes celulares, que poderão ser corados posteriormente.\nDiafanização: Tratamento das amostras biológicas de modo a torná-las semitransparentes. Utilizadas em processos de venação, epidermes, estruturas reprodutoras, etc.\n• Água sanitária (hipoclorito de sódio 5 a 50%)\n• Ácido cromo-bicromato de potássio\n• Cloral hidrado\n• Hidróxido de potássio ou sódio Microtécnica Vegetal\n5- Amolecimento\nAmolecedores são substâncias capazes de alterar ou degradar substâncias que conferem dureza e resistência aos tecidos\n• Ácido fluorídrico\n• Ácido acético-etanol\n6- Infiltração e inclusão em parafina\nApós a desidratação o álcool é substituído pelo xilol, que vai agir como dissolvente da parafina.\nTerminada a infiltração, segue-se a inclusão das peças em blocos de parafina. Microtécnica Vegetal\n7- Corte\nCorte (ato de cortar) x Seção (resultado da ação)\n• Material fresco ou fixado, embocado ou não-embocado\n• Espessura da seção depende do objetivo do estudo\n• Material cortado a fresco (histológico) ou fixado\n• Tipos de corte\n• Métodos:\n→ Cortes à mão livre\n→ Micrótomo de Ranvier, de Mesa, de Congelamento, Automático ou Rotativo Microtécnica Vegetal\n\n8- Adesivos (Afixação)\n\nOs adesivos são empregados para afixar os cortes histológicos nas lâminas. São misturas contendo substâncias poliméricas que permitem a adesão dos cortes, possibilitando a realização de várias técnicas sem a perda do material.\n• Albumina glicerinada\n• Gelatina\n\n9- Coloração\n\nObjetivo: coloração e identificação da natureza das paredes celulares. Passar o material em soluções corantes ou reagentes. O material poderá apresentar uma ou mais cores, ou então apenas algumas estruturas serão coradas.