Imunocromatografia: Técnicas e Aplicações em Diagnóstico Rápido

imunocromatografia manukbelem Os imunoensaios são técnicas feitas em placas que podem detectar e quantificar muitos tipos de moléculas através de reações anticorpo antigénio Um imunoensaio normalmente envolve um analito um anticorpo direcionado e marcadores Estes são relativamente sensíveis específicos baratos e rápidos amplamente utilizados num ambiente clínico principalmente para o diagnóstico de doenças infeciosas identificação de marcadores tumorais testes de alergia e monitoração dos níveis de fármacos Os imunoensaios são classificados de acordo com o tipo de marcador utilizado incluindo enzimas isótopos radioativos marcadores emissores de luz entre outros Alguns exemplos destes são Precipitação Aglutinação Imunofluorescência Radioimunoensaio ELISA Western blotting Quimioluminescência Eletroquimioluminescência Citometria de fluxo Imunocromatografia testes qualitativos teste de triagem rápido econômico fácil interpretação leitura feita a olho nu sensibilidade e especificidade similares ao ELISA A imunocromatografia conhecida também como teste rápido foi desenvolvida nos anos 60 visando o estudo de proteínas séricas Atualmente esta é umas das técnicas imunológicas mais utilizadas para diagnóstico e triagem terapêutica rápida Ela surgiu como uma maneira de atender a grande demanda de testes diagnósticos geralmente demorados além de serem mais práticos por não necessitar de profissionais especializados para serem feitos nem infraestrutura laboratorial adequada além de dispensar o transporte de amostras e a necessidade de coleta de sangue venoso Dessa forma os testes rápidos possibilitam a liberação dos resultados e a assistência ao paciente em uma única consulta de forma rápida De forma geral as características e vantagens dos testes rápidos são manukbelem tipos imunocromatografia de fluxo lateral o mostrador desse tipo de exame possui dois marcadores controle C e teste T A amostra e a soluçãotampão são colocadas no mesmo lugar uma sobre a outra Dali os anticorpos fluem lateralmente pela membrana com a solução reagente interagindo com os marcadores C e T Na área T eles ligamse ao analito investigado e na área C são capturados por anticorpos antiimunoglobulina Existem 4 tipos principais de testes imunocromatográficos imunocromatografia de dupla migração amostra e a solução tampão são colocadas no mesmo local mas um segundo tampão que libera as partículas conjugadas é aplicado em outra área e migra separadamente até a janela de leitura do teste imunoconcentração a amostra é colocada sobre a membrana e quando os anticorpos passam pela área onde estão imobilizados os antígenos do agente infeccioso investigado membrana de nitrocelulose eles se ligam formando um complexo Em seguida é adicionado o conjugado e a proteína A do conjugado vai se ligar aos anticorpos do complexo Assim a concentração do ouro coloidal permitirá a visualização de um ponto colorido manukbelem teste por fase sólida baseiase no princípio metodológico de um ELISA indireto em que a fase sólida se apresenta em um pente com 12 dentes Cada dente contém uma área com anticorpos antiimunoglobulina humana para o controle da reação e uma ou mais áreas com os antígenos mecanismo de funcionamento O sistema é realizado em uma matriz constituída de membrana de nitrocelulose ou de náilon coberta por acetato transparente para facilitar a visualização do teste O antígeno ou o anticorpo é fixado na membrana na forma de linhas ou pontos e o restante da membrana é bloqueado com proteína inerte Para detectar antígeno empregase um anticorpo de captura ligado à matriz e um anticorpo marcado com partículas coloridas específico para o antígeno pesquisado Por outro lado para detectar anticorpo utilizase um antígeno específico ligado à matriz e um anticorpo antiimunoglobulina marcado com partículas coloridas Um dos métodos imunológicos desses testes emprega corante insolúvel como ouro coloidal róseo ou prata coloidal azul marinho como revelador da interação antígenoanticorpo Para realizar o teste a amostra é colocada no local indicado na membrana área A e a solução tampão é colocada sobre a amostra Os anticorpos da amostra fluem lateralmente pela membrana por capilaridade passando pela área I onde se inicia a ligação com o conjugado e prosseguem em direção à área de teste T Na área T o complexo anticorpoconjugado ligase aos Ags do agente investigado formando uma linha colorida em virtude do corante Resultado positivo duas linhas são visíveis sendo uma linha na região controle C e outra na região teste T A intensidade de cor da linha teste poderá variar de acordo com a concentração do analito AgAc presente na amostra mas qualquer intensidade indica positivo Resultado negativo apenas uma linha é visível na região controle C não sendo observada linha na região T Resultado inválido não é evidenciada a linha controle C As razões mais comuns de falha são o volume insuficiente de amostra ou falha no procedimento técnico Neste caso devese reler a técnica e repetir o teste com uma nova tira manukbelem O conjugado não ligado ao anticorpo e o excesso do complexo imune continuam a migração ao longo da membrana de nitrocelulose em direção à área controle C onde são capturados por anticorpos anti imunoglobulina anticorpo conjugado formandooutra linha colorida leitura do resultado