Recepção e Preparação de Amostras para Análise em Microbiologia de Alimentos

Recepção e preparação de Recepção e preparação de amostras para análise amostras para análise Microbiologia de alimentos Microbiologia de alimentos Recepção Recepção Embalagem Embalagem Transporte Transporte Identificação Identificação Preparação Preparação Retirada da unidade analítica Retirada da unidade analítica homogênea homogênea Preparação de diluições decimais Preparação de diluições decimais seriadas seriadas Sólidos ou líquidos concentrados Sólidos ou líquidos concentrados Abertura das embalagens desinfetar a Abertura das embalagens desinfetar a parte externa com etanol 70 observar parte externa com etanol 70 observar anormalidades na amostra anormalidades na amostra Retirada da unidade analítica em média Retirada da unidade analítica em média retirase 25g e transfere para um frasco retirase 25g e transfere para um frasco de homogeneização esterilizado de homogeneização esterilizado Cuidados na retirada da unidade Cuidados na retirada da unidade analítica analítica Cuidados assépticos fazer a retirada em Cuidados assépticos fazer a retirada em câmara de fluxo laminar ou próximo à câmara de fluxo laminar ou próximo à chama do bico de Bunsen em ambiente chama do bico de Bunsen em ambiente fechado usar instrumentos esterilizados fechado usar instrumentos esterilizados Líquidos concentrados e alimentos Líquidos concentrados e alimentos pastosos moídos ou pós essas amostras pastosos moídos ou pós essas amostras devem ser homogeneizadas com espátula devem ser homogeneizadas com espátula estéril em tempo inferior a 15 minutos estéril em tempo inferior a 15 minutos Alimentos sólidos usar faca ou tesoura estéril Alimentos sólidos usar faca ou tesoura estéril para cortar diversos pontos da amostra para cortar diversos pontos da amostra Amostras heterogêneas retirar amostra de cada Amostras heterogêneas retirar amostra de cada uma das camadas ou macerar toda a porção e uma das camadas ou macerar toda a porção e retirar uma só parte retirar uma só parte Alimentos congelados deve ser feita Alimentos congelados deve ser feita amostragem sem o descongelamento prévio ou amostragem sem o descongelamento prévio ou descongelamento em geladeira e em descongelamento em geladeira e em embalagem original embalagem original Amostras com quantidades menores do Amostras com quantidades menores do que a necessária submeter somente que a necessária submeter somente metade do material à análise a amostra metade do material à análise a amostra juntamente com o diluente devem cobrir juntamente com o diluente devem cobrir as facas do aparelho as facas do aparelho Análise de Análise de Salmonella Salmonella retirar 25g de retirar 25g de amostra para cada microorganismo que amostra para cada microorganismo que se deseja analisar se deseja analisar Amostras de moluscos em conchas lavar as mãos com Amostras de moluscos em conchas lavar as mãos com água e etanol 70 lavar a concha com água e escova água e etanol 70 lavar a concha com água e escova deixar que sequem naturalmente sobre uma toalha deixar que sequem naturalmente sobre uma toalha estéril abrir a concha e remover o organismo e o líquido estéril abrir a concha e remover o organismo e o líquido e transferir para um frasco estéril e transferir para um frasco estéril Amostras de ovos levar os ovos para estufa à 20C em Amostras de ovos levar os ovos para estufa à 20C em seguida para estufa à 25C e posteriormente à seguida para estufa à 25C e posteriormente à temperatura ambiente laválos com água a 11C acima temperatura ambiente laválos com água a 11C acima da temperatura dos ovos e detergente mergulhálos em da temperatura dos ovos e detergente mergulhálos em etanol 70 flambálos e transferir o conteúdo para um etanol 70 flambálos e transferir o conteúdo para um frasco estéril e homogeneizar por 2 minutos antes do frasco estéril e homogeneizar por 2 minutos antes do processo de diluição processo de diluição Homogeneização e preparo da Homogeneização e preparo da primeira diluição da amostra primeira diluição da amostra A homogeneização é precedida de uma A homogeneização é precedida de uma diluição de 110 adicionando 25g de diluição de 110 adicionando 25g de amostra e 225mL de diluente adequado amostra e 225mL de diluente adequado Diluente água peptonada 01 água salina Diluente água peptonada 01 água salina peptonada ou tampão fosfato pH 72 peptonada ou tampão fosfato pH 72 Derivados de leite Derivados de leite citrato de sódio 2 ou água citrato de sódio 2 ou água destilada estéril destilada estéril Salmonella Salmonella diluição feita direto no caldo de diluição feita direto no caldo de enriquecimento sendo usada uma segunda enriquecimento sendo usada uma segunda unidade analítica com diluente tradicional unidade analítica com diluente tradicional Moluscos em conchas Moluscos em conchas diluição 11 Se não for diluição 11 Se não for possível pipetar o material diluir a 13 possível pipetar o material diluir a 13 Condimentos Condimentos11g diluídas em 99mL de diluente 11g diluídas em 99mL de diluente Espessantes Espessantes trabalhar com unidades analíticas trabalhar com unidades analíticas de 5 a 125g com diluição de 1100 de 5 a 125g com diluição de 1100 Homogeneização com o diluente pode Homogeneização com o diluente pode ser feita de várias formas dependendo ser feita de várias formas dependendo das características da amostra das características da amostra Líquidos concentrados moídos ou em Líquidos concentrados moídos ou em pó pó homogeneizados por agitação manual homogeneizados por agitação manual ou em shaker rotativo ou em shaker rotativo Sólidos Sólidos trituração em liquidificador 8000 a trituração em liquidificador 8000 a 15000rpm por 2 minutos com diluente 15000rpm por 2 minutos com diluente préresfriado préresfriado Alimentos pastosos Alimentos pastosos homogeneizar por homogeneizar por dispersão em stomacher por 30 a 60 dispersão em stomacher por 30 a 60 minutos minutos Espessantes Espessantes o diluente não deve ser o diluente não deve ser adicionado ao produto pois dificulta a adicionado ao produto pois dificulta a dispersão Pesar a amostra adicionála dispersão Pesar a amostra adicionála ao diluente sob agitação através de um ao diluente sob agitação através de um agitador magnético agitador magnético Pós de baixa solubilidade Pós de baixa solubilidade agitar em agitar em agitador magnético adicionando diluente agitador magnético adicionando diluente aos poucos aos poucos Alimentos gordurosos Alimentos gordurosos utilizase diluente utilizase diluente suplementado com 1 de Tergitol 7 suplementado com 1 de Tergitol 7 aniônico Tween 80 ou Triton x100 aniônico Tween 80 ou Triton x100 Deixar de 2 minutos em liquidificador Deixar de 2 minutos em liquidificador 8000rpm 8000rpm Intervalo entre a homogeneização e o Intervalo entre a homogeneização e o prosseguimento da análise não pode prosseguimento da análise não pode ultrapassar 3 minutos ultrapassar 3 minutos Diluições seriadas da amostra Diluições seriadas da amostra homogeneizada homogeneizada Para preparar a segunda diluição Para preparar a segunda diluição transferir 1mL da primeira diluição para transferir 1mL da primeira diluição para 9mL de diluente Depois transferese 1mL 9mL de diluente Depois transferese 1mL para 9mL de diluente para 9mL de diluente Seleção do diluente para as diluições Seleção do diluente para as diluições subsequentes é o mesmo usado na subsequentes é o mesmo usado na primeira diluição primeira diluição Seleção do número de diluições depende Seleção do número de diluições depende do nível de contaminação esperado Se a do nível de contaminação esperado Se a contagem encontrase por volta de 2500 contagem encontrase por volta de 2500 a 25000g as diluições são 101 102 e a 25000g as diluições são 101 102 e 103 103 Transfrerência de volumes entre as Transfrerência de volumes entre as diluições usar sempre uma pipeta diluições usar sempre uma pipeta diferente pra cada diluição agitar o frasco diferente pra cada diluição agitar o frasco preencher completamente a pipeta antes preencher completamente a pipeta antes de selecionar a quantidade ideal escolher de selecionar a quantidade ideal escolher pipetas com capacidade no máximo 10 pipetas com capacidade no máximo 10 vezes superior ao volume que vai ser vezes superior ao volume que vai ser coletado a liberação do volume deve ser coletado a liberação do volume deve ser feita com a ponta da pipeta encostada na feita com a ponta da pipeta encostada na parede do frasco parede do frasco Preparação de amostras líquidas Preparação de amostras líquidas para análise para análise Mistura da amostra invertese a Mistura da amostra invertese a embalagem 25 vezes num arco de 30cm embalagem 25 vezes num arco de 30cm em frasco com espaço livre para esse em frasco com espaço livre para esse procedimento quando isso não for procedimento quando isso não for possível transfere a amostra de um frasco possível transfere a amostra de um frasco para outro por 3 vezes para outro por 3 vezes Abertura das embalagens limpar a área Abertura das embalagens limpar a área externa com etanol 70 externa com etanol 70 Primeira diluição transferir 1mL da Primeira diluição transferir 1mL da amostra para 9mL de diluente Na análise amostra para 9mL de diluente Na análise de refrigerantes pelo método de filtração de refrigerantes pelo método de filtração em membrana não é feita diluição em membrana não é feita diluição Diluições seriadas o mesmo Diluições seriadas o mesmo procedimento descrito para alimentos procedimento descrito para alimentos sólidos sólidos Técnica de lavagem superficial Técnica de lavagem superficial Aplicação carcaças de aves cortes de aves Aplicação carcaças de aves cortes de aves camarões peixes cascas de ovos condimentos camarões peixes cascas de ovos condimentos em grãos sementes folhas amêndoas e em grãos sementes folhas amêndoas e superfície de embalagens superfície de embalagens Procedimento pesar a amostra adicionar o Procedimento pesar a amostra adicionar o diluente lavar a amostra agitando manualmente diluente lavar a amostra agitando manualmente ou em shaker No caso de ou em shaker No caso de salmonella salmonella o diluente o diluente é o próprio caldo de enriquecimento é o próprio caldo de enriquecimento Obs o resultado é dado em unidades Obs o resultado é dado em unidades formadoras de colônias por grama formadoras de colônias por grama Técnica do esfregaço de superfície Técnica do esfregaço de superfície Aplicação peixes carcaças e cortes de bovinos Aplicação peixes carcaças e cortes de bovinos suínos e aves superfícies e embalagens suínos e aves superfícies e embalagens Procedimentos delimitar a área a ser amostrada Procedimentos delimitar a área a ser amostrada usando um molde aplicar o swab com pressão usando um molde aplicar o swab com pressão em inclinação de 45C em movimentos da em inclinação de 45C em movimentos da esquerda pra direita e depois de cima pra baixo esquerda pra direita e depois de cima pra baixo e finalmente fazendo movimentos circulares Em e finalmente fazendo movimentos circulares Em superfícies secas recomendase umedecer o superfícies secas recomendase umedecer o swab swab Obs segurar o swab pela parte superior e não Obs segurar o swab pela parte superior e não próximo ao algodão próximo ao algodão Obs os resultados são expressos em Obs os resultados são expressos em UFC por cm UFC por cm22 de amostra de amostra