Testes Diagnósticos para Detecção de Antígenos e Anticorpos

TESTES DIAGNÓSTICOS ANTÍGENOS Testes Imunológicos TESTES EMPREGADOS NA DETECÇÃO DE ANTIGENO OU ANTICORPO TESTES RÁPIDOS Coleta da amostra IMUNOCROMATOGRAFIA DE FLUXO LATERAL Filtro da amostra Malha de algodão nitrocelulose ou fibras devidro Área intermediária Filtro de absorção Suporte do conjugado Ac ou Ag ligados a nanopartículas de Au ou Ag coloidal O TESTE É DIVIDIDO EM QUATRO ÁREAS Área da amostra Área Intermediária Área Teste Uso de proteínas recombinantes ou anticorpos monoclonais produzidos em laboratório Área Teste Ag imobilizados na área teste para captura de AC Ac imobilizados na área teste para captura de Ag Proteína A de Staphilococcus aureus se liga a porção FC de imunoglobulinas humanas Área controle Filtro absorvente Filtro absorvente Puxa o fluido adicionado na região teste e garante o fluxo unilateral C COVID19 IgGIgM Anticorpos IgM IgG C CONJUGADO TESTE AntiIgM AntiIgG TESTE CONTROLE AntiIgM AntiIgG IgG não específico RESULTADO POSITIVO RESULTADO NEGATIVO Nao Reagen te SARSCoV2 RESULTADO INVÁLIDO Inválidos Comparação teste rápido para Antígeno e PCR Método ELISA EnzymeLinked Immunosorbent Assay ELISA Enzymelinked immunosorbent assay Técnica muito usada no laboratório clínico Princípio Básico Imobilização de um dos reagentes Ag ou Ac na fase sólida enquanto o outro reagente Ag ou Ac esta ligado a uma enzima É um teste com alta sensibilidade especificidade é rápido de baixo custo e pode ser adaptado a diferentes graus de automação ELISA Fase sólida Poliacrilamida Geralmente são usadas placas de 96 poços por permitirem a realização de múltiplos ensaios e automação Essas placas podem ser adquiridas na forma intacta como tiras ou poços individuais para um número menor de amostras antígeno enzima substrato enzimareação de cor anticorpo primário ELISA direto ELISA indireto ELISA sanduíche ELISA de competição 1a Etapa Sensibilização da placa Ligação do Ag ou Ac à placa através de interações hidrofóbicas LAVAGEM 2a Etapa Bloqueio O bloqueio é feito com uma solução com alta concentração de proteína inerte leite desnatado albumina bovina BSA Evitase a ligação inespecífica de componentes do soro à placa LAVAGEM ELISA Indireta Etapas 3a Etapa Adição da amostra Soro diluído curva doseresposta LAVAGEM 4a Etapa Adição do Conjugado Anticorpo marcado com enzima LAVAGEM 5a Etapa Adição do Substrato Cromógeno Formação de uma cor 6ª Etapa Adição da solução STOP ELISA Indireta Etapas Diagram of steps in an Indirect ELISA Na detecção de IgM pelo método indireto podem ocorrer resultados falsos negativos ou positivos devido a presença de IgG eou de fator reumatóide Fase sólida é sensibilizada com Ac específico antiregião Fc de IgM Os soros em testes são incubados havendo a captura de qualquer IgM presente na amostra A seguir incubase o antígeno marcado ou o Ag não marcado seguido do anticorpo específico marcado ELISA captura sanduíche IgM ELISA captura sanduíche IgM ELISA captura sanduíche Antígenos ELISA de competição Utiliza um AG marcado para competir com o alvo O Ag marcado se liga menos quando houver maior quantidade de Ag não marcado da amostra e assim a intensidade da cor formada é inversamente proporcional a quantidade de Ag não marcado da amostra testeE utilizado principalmente quando o alvo marcado é pequeno ou possui poucos epítopos de ligação no text extracted 800TS microplate reader httpswwwyoutubecomwatchvcke94OREOnc Vídeo aula ELISA complementar